کلونینگ و سکانس نمودن ژن مربوط به پروتئینesat-6 از مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در پلاسمید یوکاریوتیک pegfp-n1 محمد صادق کوشا

سل یکی از معضلات بهداشتی و پزشکی جامعه بشری است، که از سالیان دور تا کنون باعث خسارات جانی و مالی فراوانی برای نسل بشر شده است.و علی رغم تمام تلاشهای صورت گرفته برای مقابله با این بیماری هنوز ان را به عنوان یکی از مهمترین علل مرگ و میر در دنیا می دانند که سالیانه 2 میلیون نفر را در دنیا به کام مرگ می فرستد. یکی از مهمترین پروتئینهای ایمنی زا در مایکوباکتریوم توبرکلوزیسesat-6است،که یک پلی پپتید9.8kdaاست که بوسیله سلولهای tشناخته می شود.و باعث القای پاسخ های ایمنی سلولی قوی می شود،و در نتیجه میزان زیادی ifn-?تولید می کند.این انتی ژن در سویه های واکسینال مایکوباکتریم و جود ندارد و تنها در انواع مایکوباکتریوم پاتوژنی وجود دارد. به نظر می رسد که ما می توانیم با اتصال پروتئین esat-6 به یک حامل مناسب مانند pegfp-n1 سبب توانمندی بیشتر در تولید لاین سلولی مقاوم شویم. این پژوهش برای کلون کردن و سکانس نمودن، پروتئینی به نام esat-6 از مایکوباکتریوم توبرکلوزیس ، به داخل یک وکتور بیانی یوکاریوتی به نام pegfp-n1 صورت گرفته است.شناسائی این ژن از راه کلون کردن و تثبیت آن با pcr،آنالیز محدود کننده و توالی یابی این ژن می تواند پایه گذارتولید نوعیstable cell line(لاین سلولی مقاوم)در آینده نزد یک باشد. که در مطالعات مربوط به بررسی پاسخ های ایمنی پروتئین فوق می توان از ان استفاده نمود. در این مطالعه، ما پس از کلون نمودن ژن مربوط به esat-6، از مایکوباکتریوم توبر کلوزیس در یک وکتور یوکاریوتی به نامpegfp-n1، در اینده پلاسمید نوترکیب حاصله را بر روی رده سلولct26 یک رده سلولی توموری مربوط به موشbalb/cاست، بااستفاده از لیپوفکتامین 2000، بیان می کنیم. و سپس درجهت مطالعه پاسخهای ایمنی زایی لاین سلولی ct-26ترانسفورم شده درموشهای آزمایشگاهی سعی می کنیم.